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如何利用細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行細(xì)胞傳代操作?

發(fā)布日期: 2022-10-08
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  細(xì)胞傳代是指需要將分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)容器內(nèi),再進(jìn)行培養(yǎng)的過程。細(xì)胞培養(yǎng)瓶是細(xì)胞通過過程中的一種常見消耗品。那么這個(gè)具體步驟是什么?
  
  1、從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用酒精噴壺在瓶身表面噴灑75%的酒精進(jìn)行消毒,然后轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)上。
  
  2、打開蓋子,輕輕吸出舊的培養(yǎng)液,用巴氏吸管加入適量的PBS緩沖液清洗1-2次,然后丟棄PBS緩沖液。
 
  

細(xì)胞培養(yǎng)瓶
 

 

  3、用吸管加入1-2毫升胰蛋白酶,并以"十字"方式搖動(dòng),使胰蛋白酶充分接觸細(xì)胞。
  
  4、將裝有胰蛋白酶的細(xì)胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置的顯微鏡平臺(tái)上,在顯微鏡下觀察細(xì)胞的消化情況。當(dāng)細(xì)胞變圓并大量脫落時(shí),準(zhǔn)備停止消化,用75%的酒精噴灑瓶子表面,然后轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)。
  
  5、用吸管(或巴氏吸管)加入等量的含血清培養(yǎng)基,終止消化。吸管充分吹氣,使細(xì)胞*脫落。
  
  6、將瓶中的混合液體轉(zhuǎn)移到離心管中,平衡并離心約5分鐘。
  
  7、離心后,用酒精噴壺噴灑離心管表面,轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)上,打開蓋子,將上清液倒入廢液槽。
  
  8、加入適量的含血清的培養(yǎng)基,用吸管吸管輕輕吹打,使細(xì)胞懸浮。
  
  9、將細(xì)胞懸液分成2個(gè)(或更多)清潔消毒的培養(yǎng)瓶,加入適量的培養(yǎng)基,并加蓋。
  
  10、將分裝好的細(xì)胞培養(yǎng)瓶放在倒置的顯微鏡臺(tái)上,觀察細(xì)胞。細(xì)胞的數(shù)量應(yīng)該得到保證。細(xì)胞太少會(huì)影響生長(zhǎng)。
  
  11、在瓶子上做標(biāo)記,注明通過時(shí)間、細(xì)胞類型、操作者和其他信息。放入培養(yǎng)箱前,再次用酒精噴灑瓶體表面,整理操作平臺(tái),用75%酒精擦拭超凈臺(tái)面,清理廢液和垃圾。
  
  細(xì)胞培養(yǎng)瓶操作時(shí)注意穿戴消毒服、手套和口罩,全程注意無(wú)菌操作,避免細(xì)胞污染。
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